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青霉素殘留elisa試劑盒操作流程

更新時(shí)間：2020-06-11   點(diǎn)擊次數(shù)：1501次
 　　青霉素殘留elisa試劑盒可用于定性、定量檢測(cè)動(dòng)物組織（肌肉、肝臟、魚(yú)、蝦等）、蜂蜜、牛奶、奶粉、冰淇淋、奶油和疫苗樣本中青霉素的殘留量。
　　試驗(yàn)原理：本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng) ELISA 方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中殘留的青霉素和酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗青霉素的抗體，加入酶標(biāo)二抗后，用 TMB 底物顯色，樣本吸光度值與其所含殘留物青霉素的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比較，再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣本中青霉素的殘留量。
　　青霉素殘留elisa試劑盒操作流程如下：
　?。?）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。
　?。?）酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
　?。?）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿(mǎn)板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿(mǎn)板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
　?。?）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
　?。?）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
　?。?）洗板，同（4）。
　　（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
　?。?）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
　?。?）洗板，同（4）。
　?。?0）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
　?。?1）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
　?。?2）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
　　（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。